淺談動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑的主要特點及操作步驟
2020-12-15 1624
動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑通過納米技術(shù)合成，通過物理作用與核酸結(jié)合，濃縮包裹核酸，從而保護(hù)核酸免受免疫系統(tǒng)破壞，同時增強(qiáng)核酸進(jìn)入細(xì)胞核中表達(dá)。不含任何動物來源成分，由于處于納米尺度，粒徑小，不易引起免疫反應(yīng)，不影響動物和器官組織的功能，可以多次在同一動物注射。
于動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染，可直接轉(zhuǎn)染RNA到動物體內(nèi)進(jìn)行：
1、基因治療的動物體內(nèi)研究；
2、RNA干擾的動物體內(nèi)研究；
3、蛋白功能的動物體內(nèi)研究。
動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑主要特點：
1、3天可以得到結(jié)果，核酸+轉(zhuǎn)染試劑，注射動物，完成轉(zhuǎn)染。
2、肝、腎、心、肺，血液系統(tǒng)，神經(jīng)系統(tǒng)，皮膚…成功應(yīng)用。
3、可方便、快捷更換不同的小片斷RNA進(jìn)行動物試驗。
4、方法先進(jìn)，拋棄病毒，眾多實驗室應(yīng)用，穩(wěn)定可靠。
5、比使用病毒節(jié)省90%以上費(fèi)用，時間縮短到3天。
動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑操作步驟：
1、傳代細(xì)胞準(zhǔn)備細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前24h傳代,待細(xì)胞密度達(dá)50%～60%滿底時即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染。加入沉淀前3～4h，用9ml*培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞。
2、DNA沉淀液的準(zhǔn)備首先將質(zhì)粒DNA用乙醇沉淀（10～50μg/10cm平板），空氣中晾干沉淀，將DNA沉淀重懸于μL無菌水中，加50μL2.5mol/LCaCl2。
3、用吸管在500μL2×HeBS中逐滴加入DNA-CaCl2溶液，同時用另一吸管吹打溶液，直至DNA-CaCl2溶液滴完，整個過程需緩慢進(jìn)行，至少需持續(xù)1～2min。
4、室溫靜置30min,出現(xiàn)細(xì)小顆粒沉淀。
5、將沉淀逐滴均勻加入10cm平板中，輕輕晃動。
6、在標(biāo)準(zhǔn)生長條件下培養(yǎng)細(xì)胞4～16h。除去培養(yǎng)液，用5ml1×HeBS洗細(xì)胞2次，加入10ml*培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞。收集細(xì)胞或分入培養(yǎng)皿中選擇培養(yǎng)。
